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炭疽暴发疫情中炭疽病例诊断方法应用与建议
海岩, 王文瑞, 范蒙光, 跃华, 宋健, 张恩民, 张慧娟, 魏建春, 聂莉
摘要319)      PDF (566KB)(784)   
目的 总结分析内蒙古自治区(内蒙古)炭疽暴发疫情中炭疽病例诊断方法的应用经验和问题,为炭疽预防控制工作提供参考。 方法 用载玻片直接蘸取和无菌棉签擦取疑似炭疽病例皮损渗出液,同时采集疑似病例静脉血标本。涂片镜检、直接分离培养、肉汤增菌后分离培养炭疽菌、炭疽芽胞杆菌实时荧光定量PCR扩增(毒素质粒的 pagA、染色体 rpoB、荚膜质粒的 cap)以及ELISA法检测双份血清炭疽抗体。 结果 2018年8月,内蒙古通辽市疾病预防控制中心实验室共采集17例炭疽病例标本,采集时间距发病时间最短1 d,最长16 d,中位数为6 d。15例可疑病例用过抗生素后采集标本(15/17,88.24%)。从1份标本中分离到炭疽芽胞杆菌,分离阳性率为5.88%(1/17);实时荧光PCR检测17份标本,阳性率为41.18%(7/17);ELISA检测保护性抗原抗体阳性率为83.33%(10/12)。 结论 在最佳时间采集标本是疫情早期定性的关键。推荐炭疽疫情中应用快速灵敏的实时荧光PCR检测诊断方法,应采集所有可疑病例双份血清提高病例诊断率。
2019, 30 (5): 494-497.    doi: 10.11853/j.issn.1003.8280.2019.05.003
炭疽芽胞杆菌致死因子在大肠埃希菌中的表达与纯化
魏建春, 张恩民, 张慧娟, 张建华
摘要537)      PDF (1049KB)(788)   
目的 在大肠埃希菌中表达炭疽致死因子,获得纯化蛋白,用于炭疽快速诊断方法以及炭疽致病机制研究。 方法 PCR方法扩增炭疽致死因子,构建表达质粒pET-LF,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,通过Ni离子金属螯合树脂进行纯化,Western blot(WB)试验检查免疫原性,MTT方法检查生物学活性。 结果 获得重组炭疽致死因子,WB结果显示重组蛋白具有良好的免疫反应性,MTT方法进行的生物学活性测定表明致死因子与保护性抗原联合,细胞毒性与文献报道相比有明显降低。 结论 所获得的重组炭疽致死因子,对于发展炭疽快速诊断方法,以及研究炭疽毒素的作用机制具有一定的促进作用。
2012, 23 (4): 295-297.
基因预测方法的研究进展
张恩民,海荣,俞东征
摘要1291)      PDF (318KB)(3940)   

【摘要】 基因预测一般指预测DNA序列中编码蛋白质的部分。其方法主要有两大类:一类是基于相似性的预测方法,即利用已知的mRNA或蛋白质序列为线索在DNA序列中搜寻所对应的片段,达到基因预测的目的;另一类是基于统计学模型的从头预测方法,即利用统计学模型训练出相应参数,再对基因进行预测,这种方法可不依赖已知的DNA序列进行预测。现就基因预测的方法、基因预测中存在的一些问题等做一概述。

2009, 20 (3): 271-273.
等位基因特异性PCR方法检测炭疽芽胞杆菌致死因子基因点突变的评价
魏建春;张建中;张恩民;马凤琴;张建华
摘要901)      PDF (246KB)(726)   
目的 建立并评价等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)在筛选炭疽芽胞杆菌致死基因点突变中的作用。方法 等位基因特异性PCR方法。结果 等位基因特异性PCR扩增的筛选方法假阳性率较高,其特异性与引物3′端的碱基类型关系不大,与退火温度、模板浓度等均有关系。高保真Taq DNA聚合酶不能改善这种假阳性。结论 等位基因特异性PCR筛选方法影响因素较多,假阳性率高,不适于直接作为点突变的筛选方法。